Na medicina, a vitamina B9 é utilizada principalmente no tratamento de deficiência de ácido fólico e de certos tipos de anemia (insuficiência de glóbulos vermelhos). Quando usada com as vitaminas B6 e B12, reduz o risco de degeneração macular relacionada à idade. O ácido fólico em conjunto com a cianocobalamina reduz as concentrações séricas de homocisteína. O folato é vital para a síntese de nucleotídeos, e a ingestão de uma dieta rica em ácido fólico é responsável pela redução de incidências de defeitos de tubos neurais em bebês. Diversos estudos de caso-controle demonstraram que o folato pode proteger contra a neoplasia em colite ulcerosa.
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